以大大降低样品内毒素含量。选择合适的层析条件,还可以利用Sephacryl S-1000HR分离不同构象的质粒DNA,达到分离纯化超螺旋质粒DNA的效果。凝胶过滤层析在工业生产中一般与其他纯化方法联合使用,放在纯化工艺的最后兼有交换质粒缓冲体系的作用。 Amersham Biosciences公司将各种层析技术组合成了一套质粒DN A生产纯化路线。第一步使用已澄清的裂解产物浓缩后直接上样,Sepharose 6FF分子筛去除RNA: 第二步使用PlasimdSelect特异吸附超螺旋质粒DNA;第三步选用Source 30Q离子交换精纯超螺旋质粒DNA。如果将初步纯化和高度纯化各工艺点合理选择和整合,利用沉淀法初步纯化去除绝大多数的杂质可以有效降低生产成本。一套纯化路线的选择取决于残留杂质的性质和分布以及质粒生产规模。同时还需要考虑效率、产率、分辨率之间的关系,以求得成本和效益的最优化。 1.7浓缩和剂型通常使用NMMCO为100KDa的中空纤维超滤浓缩包浓缩原液至成品所需浓度, 对质粒DNA几乎没有构象上的破坏。质粒DNA使用的缓冲体系一般为PBS(pH=7.2) 或TE(pH=8.0)溶液。水针剂型DNA疫苗目前常使用.80。C保存。其他给药剂型还有脂质体和海藻酸钠微球等,可以使用冷冻干燥工艺降低DNA疫苗的保存条件。 1.8结语作为第三代疫苗的DNA疫苗能够更好地体现出对疫苗的新的要求,即使免疫原性与致病性分离,也更好地体现了疫苗发展的新趋势,即病原免疫学信息的可调控的精确高效呈递、将与疫苗效果无关的信息降至最小程度。DNA疫苗技术应该是未来疫苗产业的主流技术,DNA疫苗产业应该是未来生物制品主流产业。DNA疫苗生产工艺研究日益成熟将加快DNA疫苗的产业化进程。 2.蛋白转导结构域 2 PTD的概念在细胞生物学及临床药学等研究领域,许多亲水性蛋白、多肽及寡核苷酸因其具
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