抗氧化活性研究方法

稳定自由基。特点:醇溶液呈紫色,波长为517nm下具有最大吸收。具有单一电子,故能接受一个电子或氢离子,有自由基清除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大光吸收波长处的吸光值下降,吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越强。实验步骤 2.实验步骤(1)酶标法检测——酶标仪?取96孔细胞培养板,各孔分别加入150μmol·L- 1的DPPH溶液180μL,各浓度梯度样品溶液20μL,终浓度分别为3.9 ~500μmol·L- 1,反应总体积200μL,以溶剂作对照。加样后,振荡混匀。封板胶封板后,室温下避光静置。分别在10~120min时间范围内于517nm处测定各孔吸光度值。观察样品抗DPPH的时效量效变化过程,确定实验的稳定性和最佳实验反应时间。?计算公式为:清除率(%)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100%VitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线10-120min内,随着作用时间的延长VitE抗DPPH作用增强,但在3.9- 31.2μmol·L- 1范围内,各时间点的药效变化不明显,62.5-500μmol·L-1浓度范围,随着浓度增加,各时间点的药物作用曲线逐渐分离,并在500μmol·L-1,各时间点量效趋于平稳。从图中可以看出,在这些时间点中,30min的量效曲线基本呈斜线上升。30minVitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线反应时间t为30min的量效曲线(相关系数)实验步骤(2)一般方法——紫外分光光度计法将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0.1mL样品加入3.5 mL DPPH甲醇溶液(0.06 mmol/L),混合30min后测定515 nm处吸光度。每份样品平行操作3次。计算公式为:清除率(%)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100%