2ml蒸馏水),加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的消光度。 (2) 双组分分光光度法 按公式③可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度。用上述任一方法求得MDA的浓度,根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量:MDA(μmol/gFW)=C2(umol/L)=6.45*(D532-D600)-0.56*D450 C2-为MDA的浓度;D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的消光度值。七、可溶性蛋白含量的测定(考马斯亮蓝染色法)1、试剂的配制(1)考马斯亮蓝溶液配制:称取0.001g考马斯亮蓝,溶于50ml90%乙醇中,加入100ml85%(W/V)的磷酸(不懂),85%是磷酸的质量分数,买回来时直接就是85%的磷酸,加入100ml就行。再用蒸馏水定容到1L,贮放在棕色瓶中,此溶液在常温下可放置1个月。(2)100μg/ml牛血清蛋白(BSA)标准溶液:称取25mgBSA加水溶解后定容至100ml,再从中吸取40ml用蒸馏水定容至100ml(也可取10mgBSA定容至100ml即为100μg/ml标准BSA溶液)。2、样品可溶性蛋白含量的测定(1)样品可溶性蛋白含量测定:称取鲜样0.5g,用5ml蒸馏水或磷酸缓冲液研磨提取。吸取样品提取液1.0Ml,放入具塞试管中(每个样品设置两个重复),加入5Ml考马斯亮蓝G-250溶液,充分混合,放置2Min后在595nM下比色,记录吸光值,并通过标准曲线查得蛋白质含量。调零管是用蒸馏水样品中蛋白质的含量(Mg/g)=C×VT/(V1×FW×1000)(2-2)式中C:查标准曲线值(μg);VT:提取液总体积(Ml);FW:样品鲜重(g);V1:测定时加样量(Ml)。我就测这五个所以帮下我谢谢。
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