第2章?核酸检测技术Р核酸检测技术Р直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。Р核酸的分离纯化?PCR技术?核酸杂交技术Р第1节?核酸的分离纯化Р核酸的分离纯化的原则Р保持核酸一级结构的完整性?提高核酸制品的纯度Р技术路线的设计Р破碎细胞的方法Р机械(匀浆、超声破、研磨等)Р非机械(化学处理、生化法)Р沉淀是浓缩核酸最常用且高效的方法。Р优点Р缺点Р乙醇Р对盐类沉淀少,易挥发除去,不影响后续实验Р需要量大,低温操作Р异丙醇Р需体积小,速度快,一般不需低温长时间放置Р易使盐类、糖类与DNA共沉淀;异丙醇难以挥发除去Р核酸浓度检测与完整性测定方法Р浓度测定? 紫外分光光度法 260nm? 荧光光度法 EB荧光Р完整性测定?琼脂糖凝胶电泳法:以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳结果为依据。?基因组DNA片段如发生降解,电泳图呈拖尾状;?完整的或降解很少的总RNA电泳图谱中,三条带的荧光强度积分应呈特定的比值Р问题一:DNA样品不纯? 抑制后续酶解和PCR反应РDNA提取常见问题РDNA提取常见问题Р问题二: DNA降解
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