Nase,RNase)的作用。抑制DNase:可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂;或加去污剂十二烷基硫酸钠(SDS);或加蛋白变性剂。抑制RNase:实验器皿高温,或高压灭菌,不能高压灭菌的用具用0.1%二乙基焦碳酸盐(diethylpyrocarbonate,DEPC)处理。加强的蛋白变性剂如硫氰酸胍、异硫氰酸胍等。加核糖核酸酶阻抑蛋白(RNasin)等RNase的抑制剂。质粒DNA的提取——碱裂解法溶液I:50mM葡萄糖,25,10mMEDTA,pH8.0——Tris-Cl→pH;葡萄糖→大肠杆菌悬浮;EDTA→金属离子螯合剂。溶液II:0.2NNaOH,1%SDS——NaOH→碱裂解细胞,控制时间,温柔混合;SDS→结合蛋白。溶液III:3M醋酸钾,2M醋酸——醋酸钾→PDS沉淀;醋酸→中和碱。3.核酸的分离与纯化高电荷磷酸骨架比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性。根据理化性质差异,选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法。①酚提取/沉淀法经典方法是酚:氯仿抽提法。裂解细胞;离心分离含核酸水相;等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1体积)混合液抽提,漩涡振荡混匀(小分子量核酸)/颠倒混匀(高分子量核酸),离心分离;疏水性的蛋白质→有机相,核酸→上层水相。缓冲液饱和酚——蛋白变性;氯仿增加有机相比重,防止酚流入水相;异戊醇可减少操作过程中产生的气泡,下层的界面更清晰。核酸盐经有机溶剂沉淀浓缩酚、氯仿抽提后用乙醇沉淀水相加pH5.0~5.5,终浓度0.3MNaAc或KAc(钠离子中和核酸磷酸骨架负电荷,在酸性环境中促进核酸疏水复性),加2~2.5倍体积乙醇,沉淀核酸。离心收集,70%乙醇漂洗核酸沉淀除盐分。其他可用于沉淀核酸的有机溶剂:异丙醇、聚乙二醇(PEG)等;盐类:10.0mol/L醋酸铵、8.0mol/L的氯化锂、氯化镁和低浓度的氯化锌等。分离沉淀DNA
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