用前取0.01mlAO与1mlPI混合,os液10倍稀释,0.22u孔径滤膜过滤,与胰岛制备物混合10分钟,在荧光显微镜下用490nm激发光滤光片,510nm光栅滤光片可同时见到绿色(AO)和红色(PI)荧光。注:os液。8图1-4胰岛DTZ染色及AO-PI染色胰岛功能检测①胰岛素释放试验:胰岛经Hanks液洗涤三次,加低糖无血清1640培养液(含2.7mmol/L葡萄糖),37℃培养2小时,收集培养液测胰岛素含量;再换高糖无血清1640培养液(含16.7mmol/L葡萄糖、10mmol/L茶碱),37℃培养2小时,收集培养液测胰岛素含量。胰岛素释放指数=高糖胰岛素/低糖胰岛素。②胰岛葡萄糖灌流试验:s,置于含滤膜的微型滤器中,37℃恒速(0.5ml/分)灌流,先用低糖Krebs液(2.8mmol/L葡萄糖)一小时,换高糖Krebs液(16.7mmol/L葡萄糖加10mmol/L茶碱)一小时;再用低糖Krebs液灌流,每隔2分钟收集灌流液,检测胰岛素含量,绘制胰岛素分泌动态图。ustcxx战友的分离和移植方法:供者胰岛的分离与纯化是通过胶原酶消化供鼠的胰腺和密度梯度离心来完成的。首先将供鼠的胰腺在体内用3.5ml胶原酶液(2mg/ml)灌注,然后将胰腺取出并置入培养皿中,在37度温箱孵化35分钟。将消化组织用HBBS液洗涤后用Ficoll密度梯度将胰岛细胞分离出来。分离后的胰岛细胞用HBBS液洗涤后进行记数,然后将300-400个胰岛细胞移植到糖尿病的受鼠体内。受鼠在麻醉后,于左肋下切开一1厘米小口,将肾脏轻挤出创面,于肾脏下极将肾包膜剪开一1毫米小口,然后将胰岛细胞植入肾包膜下,还纳肾脏后关闭皮肤创面。小鼠糖尿病是通过腹腔内注射streptozotocin(STZ)225mg/kg所诱导的。因为STZ选择性的破坏胰腺的β细胞。5天后当血糖>300mg/dl时糖尿病诱导成9
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