1.2 胰岛素提取分离工艺Р1.2.1 胰脏低温保藏?1.2.2 组织捣碎及细胞破碎?1.2.3 提取? 一液固萃取分离法? 二固液分离方法?1.2.4 纯化与精制? 一沉淀法? 二柱层析法? 三浓缩? 四结晶? 五干燥Р胰脏冷冻Р胰脏刨碎成片Р提取Р碱化、酸化Р减压浓缩Р去脂、盐析Р精制Р一、胰脏冷冻Р胰脏在冻结状态下粉碎,有利于细胞膜的破裂使之提取完全,并可避免蛋白水解酶对胰岛素的破坏。Р二、胰脏刨碎成片Р刨碎成片有利于与酸醇提取剂充分接触,增大提取率。Р三、提取Р1)pH为2.5~3.0(胰岛素在酸性条件下稳定)Р2)乙醇含量为70%左右。(在此浓度下,胰岛素溶解度比较大,过高会使胰岛素变性)Р3)温度为13~15℃(低温,保持胰岛素活性)Р五、减压浓缩Р吸上层清液至真空蒸发器内,下层用帆布过滤,沉淀物弃去,滤液并入上清液。清液在30℃以下减压蒸去乙醇,浓缩至浓缩液比重为1.04~1.06(约为原来体积的1/9~1/10)为止。Р在这步操作中,主要是用来缩小溶液的体积,浓缩至一定的浓度,以便于下步的盐析操作。Р六、去脂、盐析Р浓缩液转入去脂锅,5分钟内加热至50℃,立即用冰盐水降温至5℃,静置3-4小时,分离出下层清液(脂层可回收胰岛素)。调pH值至2.3~2.5,于20~25℃在搅拌下加入27%(W/V)固体氯化钠,保温静置数小时,析出之物即为胰岛素粗品。Р脂肪加热溶解,密度小,浮在上层液,迅速冷却将其去除Р七、精制Р1)第一次结晶Р获得较纯的胰岛素,等电点结晶法,离心分离Р2)第二次结晶Р结晶、离心,同上Р3)干燥
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