Р 10 μmol/L F3(外引物 1) 0.1 μmol/L 0.25Р 10 μmol/L B3(外引物 2) 0.1 μmol/L 0.25Р 10 μmol/L LF(环引物 1) 1.0 μmol/L 2.5Р 10 μmol/L LB(环引物 2) 1.0 μmol/L 2.5Р 8000 U/mL Bst DNA 聚合酶 640 U/mL 2.0Р DNA 模板— 1.0Р 无菌去离子水— 0.5Р7.5.2 反应程序:将反应管中的反应体系混匀,置于63 ℃扩增40 min,再置于80 ℃保温10 min,Р终止反应。Р7.5.3 对照:检验过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。以鼠伤寒沙门氏菌 14028Р纯培养物提取的DNA模板为阳性对照,以非沙门氏菌纯培养物提取的DNA模板为阴性对照,以无Р菌去离子水代替DNA模板为空白对照。Р7.6 结果观察Р LAMP反应结束后,应于2 min内在反应管加入1 000×SYBR Green I染料l μL,轻轻混匀,立即Р观察颜色变化。Р8 结果判定和报告Р 在空白对照和阴性对照反应管液体显示为橙色,阳性对照反应管液体显示为黄绿色的条件下:Р8.1 阳性:若SC或TTB任一增菌液的反应结果显示为黄绿色,则判定25 g样品中沙门氏菌初筛结Р果为阳性,应按照GB 4789.4方法继续进行5.3分离、5.4生化试验和5.5血清学鉴定,必要时进行5.6Р血清学分型,综合生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g样品中检出或未检出沙门氏菌,根据血Р清学分型试验结果判定沙门氏菌的血清型。Р8.2 阴性:若SC和TTB增菌液的反应结果显示均为橙色,则判定结果为阴性,可直接报告25 g样Р品中未检出沙门氏菌。Р 注:LAMP 实验环境条件和过程控制应参照 GB/T27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》规定执Р行。Р 5
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