用。实验研究方面,针对益肺方治疗非小细胞肺癌的作用机制进行了多项实验。方法:(1)四甲基偶氮唑蓝(MIT)显色法,观察益肺方对人肺癌细胞株A549的生长抑制作用;(2)AO/EB染色,观察人肺癌细胞株A549的细胞形态学及超微结构的改变及对凋亡的影响;(3)PCR基因芯片,检测益肺方对人肺癌A549细胞在肿瘤相关生物学通路基因表达的影响,分析其诱发基因谱改变的特征生物学通路;(4)Real-timeQuantitativePCRDetectingSystem(qPCR),验证益肺方对特征生物学通路上血管生成相关基因表达的调控作用,探讨其抗肿瘤作用的分子机制。结果:(1)MTI法:益肺方在体外对人肺癌A549细胞有明显的抑制作用,且这种抑制作用呈现浓度和时间依赖性;(2)形态学观察:AO/EB染色显示益肺方作用于A549肿瘤细胞后,给药组早期凋亡细胞略多于空白对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。(3)基因芯片:实验组与对照组比较在检测的89个基因中有8条基因表达水平显著上调,22条基因表达水平显著下调。差异表达基因主要与血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等有关。(4)qPCR:与对照组相比,不同药物浓度实验组中的A549细胞中的VEGF、IL8、COX-2的表达水平均有不同程度的下调,并呈一定的量效关系,而其中COX-2且随给药浓度降低,有上调趋势,而IFNA基因在药物浓度为5mg/ml条件下表达水平显著上升,其余两组皆表达水平明显下调。分析实验结果,证实益肺方具有抑制人肺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡的作用,提示益肺方通过调控血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等多条肿瘤相关生物学通路的基因水平,从而影响肺癌的发生与转化。益肺方对血管生成相关基因表达水平显著的调控作用可能是益肺方抑制人肺癌细胞生长,治疗非小细胞肺癌的主要分子机制之一。
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