重要的作用,因此我们推测miR-449a可能通过c.Met影响细胞侵袭和迁移。八、NSCLC组织中miR-449a与e-Met的表达关系为明确NSCLC组织中miR.449a与c.Met的表达关系,我们从84例配对组织中选取27对组织,使用Western blot检测c—Met的表达。27例配对组织中c.Met 在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(paired T-test,p<0.001,户6.352),而在这27 例组织中miR-449a在癌组织中的表达水平是显著低于癌旁组织的。Spearman相关分析显示27例配对组织中miR一449a与c.Met的表达存在负相关(r=.0.602,P <O.01),考虑到miRNA通过与靶基因mRNA互补结合从而抑制靶基因表达的作用方式,c.Met可能为miR.449a的靶基因。九、miR-449a调控靶基因e-Met 为证实c.Met是否为miR.449a的靶基因,我们向miR.449a中等表达强度的 A549和H 1299细胞转染miR.449a mimic,mimic control,miR.449a inhibitor, inhibitorcontrol,转染后48小时收集细胞,使用RT.qPCR检测c.Met mRNA的变化,使用Westernblot检测c.Met蛋白水平的变化。在A549细胞中上调miR.449a 表达水平,c.Met的mRNA和蛋白都有所减少(mRNA-p<0.01,蛋白:p<0.01), 而下调miR.449a表达水平,c.Met的mRNA和蛋白都有所增3II(mRNA.p<0.01,蛋白:p<0.01)。在H1299细胞系也得到一致结果。为进一步证实c.Met是否为miR.449a直接调控的下游靶基因,我们通过报告基因实验明确miR.449a是否通过c.Met的YUTR的靶位点对其表达进行负向调 7
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