而成的大孔亲水凝胶,带有很多羟基,可用钛螯合法供酶的固定。钛盐无毒、无致癌性,价格低廉,且载体可以回收。Р(5)硫醇一二硫化物互换反应法。聚合的二硫化物混合物可进行硫醇一二硫化物互换反Р应,产物可以与酶蛋白中的巯基进行可逆的偶联反应,并且只有巯基才能与之偶联,从而将酶蛋白固定在硫醇一二硫化物互换反应的产物—硫醇聚合物中。Р(6)四组分缩合反应法。羧酸、亚胺、醛和异氰酸四组分的缩合反应可生成一种N一取Р代的酰胺。选择适当的载体加入一取代的酰胺,可使酶蛋白中的氨基和羧基直接相互偶联而固定化。此法适用于固定对醛不敏感的酶。Р武汉化工学院柏正武,尹传奇,吴莉,王存文等人用甲醛取代戊二醛作为偶联剂,以3-氨基丙基硅胶为载体进行脂肪酶的固定化,取得了良好的效果。Р固定化酶以如下步骤制备:10 g 32氨基丙基硅胶加入30 mL 2 %甲醛的缓冲溶液(pH 8.0) 中,在4 ℃下搅拌12 h 。抽滤,用磷酸盐缓冲溶液洗涤。再将与甲醛反应过的载体加入到含0133 g脂肪酶的30 mL 磷酸盐缓冲溶液中,在4 ℃下反应过夜。抽滤,固定化酶用磷酸盐缓冲溶液充分洗涤,然后经真空干燥。Р柏正武等人研究发现用甲醛取代戊二醛作为偶联剂,以3-氨基丙基硅胶为载体进行脂肪酶的固定化的适宜条件为: 固定化酶的最适反应温度在30 ℃附近; 固定化酶在碱性范围内的稳定性高.Р4. 肽键结合法Р肽键结合法是指在酶蛋白与水不溶性载体问形成肽键而被固定的方法。此类方法包括以下几种:Р4.I 用酰基迭氮衍生物固定化Р(1)将CM 纤维素酶转变为甲酯,再与肼作用,成为酰肼,此酰肼与亚硝酸作用成为相应的迭氮衍生物。此衍生物在低温下与酶蛋白作用,使酶固定化。Р(2)聚甲基各氨酸通过迭氮反应成为酰基迭氮衍生物,可用作脲酶和尿酸酶的载体制成固定化酶。这些固定化酶可做成薄膜球状、条状等,酶的活性可保留95% 以上.且热稳定性高。
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