支原体快速法:Р ①所有操作均在室温(22-28℃)下进行Р ②打开检测板,在孔中加入40 μL Reaction Buffe AР ③第一个孔加入10 μL阴性对照,其他孔加入10 μL待测样品或阳性对照④轻轻混匀,室温孵育5分钟Р ⑤所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe BР ⑥轻轻混匀,室温孵育4分钟⑦每孔加入5μL Stop Solution,轻轻混匀Р ⑧可在30分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存:Р 结果分析Р 如果待测样品的颜色深于阴性对照,表明样品被支原体污染Р 如果待测样品的颜色与阴性对照相同,表明样品没有支原体污染Р ⑨做好结果记录并填写质量报告Р 支原体ELISA法:Р GMP质量管理文件编号:SOP/ZK/002Р ①编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)Р ②加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀Р ③温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟Р ④配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用Р ⑤洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干Р ⑥加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外Р ⑦温育:操作同 3Р ⑧洗涤:操作同 5Р ⑨显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟Р ⑩终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)Р 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行
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