SOD、POD、CAT、MDA和可溶性蛋白的测定方法

算单位:NBT光还原50%为单位Р SOD 比活性(酶单位/mg蛋白)= SOD总活性/蛋白质浓度Р 四、POD(过氧化物歧化酶)的测定:Р 1. 0.1M PH6.0磷酸缓冲液的配制:A液219.25+B液30.75,定容至500毫升;Р 2. POD反应液的配制:0.1M PH 6.0的磷酸缓冲液50毫升于烧杯中,加入愈创木酚28微Р 升,磁力搅拌器加热搅拌使之完全溶解,冷却后加入30%H2O219微升混合,保存于冰箱中。Р 3. POD的测定:20微升酶液+3毫升反应液于比色皿中,在470nm下每隔1分钟读数一次,Р 共读三次,以每分钟吸光度变化值(ΔA470/min·mg pr或ΔA470/ mgFW)表示酶活力的大小。Р 4. 结果计算:POD=ΔA470×500Р 五、CAT(过氧化氢酶)的测定:Р 1. CAT反应液的配制:Р 0.1MH2O2溶液:0.568毫升30% H2O2定容至100毫升。Р 0.1MPH7.0磷酸缓冲液:97.5毫升A液+152.5毫升B液,定容至500毫升。Р 0.1M的H2O25毫升+0.1M的PH7.0的磷酸缓冲液20毫升(即按1:4的比例)混匀,即为CAT反应液。Р 2.CAT的测定:0.1毫升(或50微升)酶液+2.5毫升反应液,240纳米下比色,每隔1分钟读数1次,共读数3次。Р 3.结果计算:CAT活性(Δ240/min·gFW)=Δ240×/0.05/0.5=Δ240×200=Δ240×V/Va/WР 六、MDA(丙二醛)的测定:Р 1.MDA反应液的配置:0.6克TBA(硫代巴比妥酸),先用少量溶解,用10%TCA(三氯乙酸)定容至100毫升。Р 2. MDA的测定:1毫升酶液+2毫升0.6%的TBA,封口沸水浴15分钟,迅速冷却后再离Р 心,取上清液,在600、532、450nm 三个波长下比色。Р 3. 结果计算