GPX、APX、CAT、SOD、AsA、GSH、MDA、Proline、可溶性蛋白、可溶性还原糖、可溶性总糖测定方法

转移至试剂瓶中,盖好瓶塞,防止CO2进入;Р 2. 实验步骤:Р (1)提取:从液氮中取出称重后,用3ml蒸馏水研磨至10ml玻璃试管中,再用4ml冲洗两次,煮沸20min,转移至离心管中(用3ml蒸馏水冲洗两次),调平后3000r/min离心15min,上清液定容至25ml;Р (2)还原糖含量测定:Р 2ml 3,5-二硝基水杨酸+2ml 提取液+4ml 蒸馏水,沸水浴5min,调零管用水代替提取液,测定OD540。Р (3)总糖含量测定:Р 2.9ml硫酸-蒽酮溶液+100ul提取液,沸水浴10min,对照加水调零,测定OD620。Р 3. 结果计算:Р 糖含量=C×VT/(Vt×W)Р C是根据标准曲线对应OD值查出的糖含量,VT、Vt分别是提取液总体积和参Р 与反应的提取液体积,W是样品质量。Р 四、脯氨酸含量测定Р 1. 试剂配制:Р 500ml 2mol/L的磷酸:67.57ml 85% H3PO4蒸馏水定容至500ml;Р 100ml酸性茚三酮试剂:2.5g茚三酮+60ml冰乙酸+40ml 2mol/L的磷酸,70℃加热溶解;Р 100ml 3%磺基水杨酸:3g 5-磺基水杨酸用蒸馏水溶解后定容至100ml;Р 2. 实验步骤:Р (1)提取:取样称量后用3ml 3%磺基水杨酸研磨,4ml冲洗再次至玻璃试管中,沸水浴15min(加盖),转移至10ml离心管中,1ml冲洗一次,3000r/min离心15min,上清液定容至10ml;Р (2)2ml提取液+2ml冰乙酸+2ml茚三酮,加盖后沸水浴30min;加4ml甲苯摇匀萃取后离心15min,取甲苯层,以甲苯调零,测定OD520,每个样品重复三次。Р 3. 结果计算:Р 糖含量=C×VT/(Vt×W)Р C是根据标准曲线对应OD值查出的糖含量,VT、Vt分别是提取液总体积和参与反应的提取液体积,W是样品质量。