基橙的紫外光谱Р对实验结果和实验中某些现象的分析讨论Р吸附色谱柱的分离效果不仅依赖于吸附剂和洗脱溶剂的选择,而且与制成的色谱柱有关;要求柱中的吸附剂用量为被分离样品量的30-40倍,若需要可增至100倍。Р 柱高与直径之比为4:1至10:1,一般为7.5:1。实验室常用的色谱柱,其直径在0.5-10cm之间。当吸附物的色带占吸附剂高度的1/10—1/4时,此色谱柱已经可作色谱分离了。色谱柱或酸式滴定管的活塞不用涂润滑脂。Р 装柱可以采用湿法或干法,干法装柱是将干吸附剂倒入柱内,填装均匀,Р然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡,否则影响Р分离效果,一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。Р 本实验采用湿法装柱。Р1、色带有重叠现象,即柱内出现彩色色带,这是由于样品进入带较宽,扩散现象严重之故,但由于甲基橙与Р次甲基兰极性相差甚大,随着洗脱进行,基本上可以得到单一化合物。Р如果遇到极性相似的化合物,分离就不完全,所以必须严格基本操作。Р2、如果洗脱剂选择不合适,会使分离不能进行。洗脱剂极性过大,被分离物一起被洗脱,达不到分离目的。洗脱剂极性过小,物质不被洗脱。所以一般要用薄层层析法来试验找到合适洗脱剂,在薄层上二个被分离物Rf值相差较大,斑点清晰,这样的洗脱剂体系在稍减少极性的条件下,可用于柱层析。Р实验精确度%Р实验方法指示及注意事项Р1.色谱柱一定要装填紧密。若柱中装填时留有气泡或各部分松紧不匀时,会Р影响渗滤速度和显色的均匀。Р2.加料时须沿柱壁绕圈加入,防止局部样品过多,或者把吸附剂冲起而影响分离效果。Р3.在分离过程中,自始至终须使整个吸附剂浸泡在溶剂中。否则当柱中溶剂或溶液流干时,就会使柱身干裂,影响渗滤和显色的均一性。Р4.一旦样品加入开始过柱后,必须保持洗脱剂的流速恒定,不得关闭活塞,否则将会造成被分离样品在分离过程中重新混合,严重影响分离效果。
全文预览
