cm,物质浓度为1mol/L时在特定波长?下的吸光度值。ε是物质的特征性常数)РLambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非?散射的液体РA=lg(I0/It)=kbcР吸光度Р介质(溶液层)厚度(cm)——光径Р吸光度与浓度的关系 A = bcР吸光度Р0.00Р光源Р检测器Р吸光度Р0.22Р光源Р检测器РbР吸光度Р0.42Р光源Р检测器РbР一般对一个新的试剂来说,总是先做标准品定标(校准),再进行相应的样本检测。Р多点定标和一点定标:? 通过多个浓度有一定梯度的标准液来定标(校准),规范出标准曲线的一定的趋势,以此来得到浓度与吸光度的函数。多点定标大多用于非线性校准,得到的标准曲线一般为二次函数的抛物线类型。只用一个标准品来定标,得到的函数为Y(浓度)=AX(吸光度)+B,是一条简单的直线。Р生化分析基本测定方法?连续监测法(速率法):? 即连续监测反应过程,按产物的生成或底物的消耗的速度(△A/min)进?行定量分析的方法,读数点必须在等速区对低浓度的样本,它的吸光度随时?间变化的慢(速率低),而高浓度样本,它的吸光度随时间的快(速率?高)。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段(斜率保持不变),常用于酶?活性线性反应期测定或以酶为工具测底物(代谢物)的浓度。?终点法:? 反应到达终点后与起始点(空白)的吸光度差与相同条件下用校正液测?得的结果比较取得结果的方法。试剂与样本反应之前的吸光度在某一定的水?平,开始反后,在主波长下出现一个最大的吸光度,得到一个较明显的吸光?度的落差,所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样本的浓度。终点?法中的反应时间是指开始反应后,试剂与反应物反应到达一定的稳定点,试?剂与反应物不再反应,吸光度不再随时间的变化而发生改变,既到达了反应?平衡。其间所要的时间就是反应时间。在反应时间进程曲线上为与x轴平行?线区段。
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