分布的原则与方法Р3.1 液相色谱的分类Р①液-液色谱:依分离系数差异进行分离。?(分离系数—组分在流动相与固定相中的? 浓度比)?②液-固色谱:依吸附能力分离。?③离子交换色谱:以离子交换树脂作为固定相,依离子交换作用分离。?④凝胶(或排阻)色谱:依分子尺寸(即分子量)大小的差异进行分离。Р3.2 凝胶色谱分离过程及原理Р3.2.1 分离过程:? 高压泵样品? ↓↓? 流动相→色谱柱→检测器→记录器?(洗脱液)(固定相凝胶)Р3.2.2 分离原理:? 利用分子尺寸大小(分子量大小)进行分离。Р3.2.3 凝胶色谱分离原理Р利用分子尺寸大小(分子量大小)进行分离Р不同分子量组分的淋出规律Р分子量(尺寸)最大的分子——不进入凝胶孔内,流程最短,流速最大,先出。Р分子量(尺寸)较大的分子——进入凝胶大孔中,流程较短,流速较快,次出。Р分子量(尺寸)小的分子——进入凝胶的所有孔中,流程最长,流速最慢。Р3.3 测定木素分子量分布的原理与方法Р①测定原理:Р 凝胶渗透色谱柱—作分离(将不同分子量? 组分分离)? 紫外分光光度计—作检测(测定各组分含量)? [或示差折光检测器—根据参比流动相和含样? 品流动相之间的折光指数(RI )的差值决定? 组分含量]Р3.3测定木素分子量分布的原理与方法Р②分析方法:? 分步取样,分别测出淋出体积(或称洗脱体积)Vi 、浓度Ci和各时期取出液的分子量大小Mi,即可得到分子量分布(即试样中各种分子量组分在总量中所占的各自的分量)。Р 取样体积(Vi) 5ml 5ml 5ml ---? 浓度C (紫外A ) A1 A2 A3 ---? 分子量(Mi) M1 M2 M3 ---? (分子量由聚苯乙烯标样确定——依据洗脱体积相同者分子量相同)? Vi × C i Vi Ai ?计算: ———————= ——————? ΣVi × C i ΣVi Ai
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