PCR基本原理及荧光PCR PPT幻灯片

РTAGCР5’Р3’РTAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCGР3’Р5’РDNA?解旋解链Р合成引物Р子链延长РGGAUCGР5‘РAUCGCGР5‘Р引物酶Р引物酶РRNA引物РRNA引物РPCR技术简史РDNA的复制?核酸体外扩增的设想?聚合酶链反应的发明Р1985年,美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应(PCR)?基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制?最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR,由于该酶不耐热,使这一过程耗时,费力,且易出错?耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行,随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪?1993年,Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖РKary B. MullisР<<The Unusual Origin ?of the Polymerase Chain Reaction>>Р1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。Р聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),又称无细胞克隆技术。Р是一种特定的核酸片段在体外进行快速扩增的方法。?非传统克隆模式,无需活细胞。?高效率,在数小时内可扩增107-108倍。?广泛应用于病毒DNA和RNA的检测。РPCR的原理Р该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端,并以此为起始点,沿模板5´→3´方向延伸,合成一条新的DNA互补链。