CR试剂的污染РPCR实验器材的污染Р气溶胶(Amplicon Aerosol)РPCR污染的四种来源Р标本或模板间的交叉污染РPCR试剂的污染РPCR扩增产物的污染Р实验室克隆质粒的污染Р引起PCR污染的原因РPCR试剂污染РPCR 试剂配制过程中, 移液器、容器、水及其他溶液等原因造成试剂被PCR 核酸模板污染。Р引起PCR污染的原因РPCR产物污染-最主要最常见?PCR 产物拷贝量大(一般为10^13拷贝/ml) ,远远高于PCR检测数个拷贝的极限。极微量的PCR产物污染, 就可形成假阳性。Р移液器吸取PCR产物进行电泳检测,同一支移液器去准备PCR mixРPCR产物的气溶胶污染:据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.Р气溶胶(aerosol):悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001μm~1000μm的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态散体系。?空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶, 在操作时比较剧烈地摇动反应管, 开盖时、吸样时及移液器的反复吸样都可形成气溶胶Р引起PCR污染的原因Р实验室中克隆质粒的污染?在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见?克隆质粒在单位容积内含量浓度高, 另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大РPCR污染的监测Р一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染,是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染. РPCR强大扩增能力+检测的敏感性?经30个周期后,特定DNA片段的数量在理论上可增加109倍?极微量的污染便可导致假阳性,尤其对定量造成很大的问题РNTC (No Template Control):必须设置一个不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应。
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