不当都会对检测结果产生很大影响。因此,必须加强ELISA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。Р标本? 在低温下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底加深,甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2~8℃保存1 周,冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心,否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融,标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,使抗体效价下降从而引起假阴性结果。Р操作因素Р加样?加样器是一种比较精密的工具,其在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准,因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本均需更换吸嘴,以免发生交叉污染;加样速度不可太快,以免将标本加在孔壁上部,并注意不要溅出或产生气泡。因此建议在加酶结合物和底物时用多道加液器,或者双人同时加样以减少操作时差对结果的影响,另外有些项目在检测前需要稀释以减少非特异性反应。Р温育?温育的温度:育常采用的温度有43 、37℃、室温或4℃等。37℃是实验室中常用的温育温度,也是大多数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃经1~2 h 产物的生成可达顶峰,为加速反应,可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4℃更为彻底,形成的产物更多、更稳定,但因所需时间太长,在ELISA检测中一般不予采用。Р干扰因素Р标本患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质,导致假阳性或假阴性的结果,干扰因素一般可分为两类,即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等,避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂;外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝固等。
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