浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制,形成透明的抑菌圈。–抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑制浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。?方法:–菌液制备:挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中,校正浓度至0.5麦氏标准;–涂布接种:无菌棉拭蘸取菌液,在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60o,最后沿平板内缘涂抹1周;–贴含药纸片:平板在室温下干燥3-5min,用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm;–孵育:35oC 16-18h,量取抑菌圈直径。注意事项1 纸片应分布均匀,中心距离不小于24mm。2 含菌平板必须避免过浓或过稀。3 纸片贴完后应在15min内将平板反过来,置于37度温箱中。4 纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5 要注意无菌操作。影响药敏结果的因素培养基应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时,厚度合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。细菌接种量细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。药物浓度药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。培养时间一般培养温度和时间为37℃,8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药的平板培养基,先置4℃冰箱内2~4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较大的抑菌圈。
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