,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整pH。4.分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污面塞而引起污染。(二)高压蒸汽灭菌法步骤1.加水使用前在锅内加入适量的水,加水不可过少,以防将灭菌锅烧干,引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物积水。水面与三角架相平为宜2.装料将灭菌物品放在灭菌桶中,不要装得过满。3.加盖盖好锅盖,按对称方法旋紧四周固定螺旋,打开排气阀。4.加热排气加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时,排出的气流很强并有嘘声时,维持2—3min以排除冷空气。如灭菌物品较大或不易透气,应适当延长排气时间,务必使空气充分排除,然后将排气阀关闭。5.加压将排气阀关闭6.保压当压力升至0.1MPa时,温度达121℃,此时应注意观察,控制热源。保持压力稳定,维持20-30min后,切断热源。7.自然降压当压力表降至“0”处,稍停,使温度继续降至100℃以下后,打开排气阀,旋开固定螺旋,开盖,取出灭菌物。注意:切勿在锅内压力尚在“0”点以上,温度也在100℃以上时开启排气阀,否则会因压力骤然降低,而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口,污染棉塞,以后培养时引起杂菌污染。压力降到“0”时,方可打开排气阀。8.保养灭菌完毕取出物品后,将锅内余水倒出,以保持内壁及内胆干燥,盖好锅盖。9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。2.调pH不要过头。3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70ºC以下放物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告姓名学号专业批次/层次指导教师学习中心
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