l以上。2.7.2悬浮型细胞生长试验2.7.2.1方法提要本试验所用容器具及溶液均为无菌,试验操作过程均为无菌操作。细胞在37℃恒温条件下,在细胞培养液中悬浮生长72h,观察细胞形态,进行72h细胞计数。2.7.2.2试剂和材料1)细胞:已适应待检细胞培养基的悬浮细胞株。2)细胞培养液:按产品使用说明书要求配制;2.7.2.3仪器1)医用净化工作台:洁净级别为百级;2)恒温震荡培养箱:能在(37±1)℃恒温;3)细胞培养瓶:250ml摇瓶,应无菌;4)显微镜:倒置、相差;2.7.2.4细胞培养1)用方瓶或摇瓶扩增细胞;2)离心细胞,用待测细胞培养液重悬细胞,计数,计算出所需要的细胞数;3)将细胞转至摇瓶中,细胞数量接种数量为2.5×105个/ml,加液量20ml左右;4)将摇瓶细胞移至恒温培养箱中培养,转速90~100rpm,温度37℃;5)培养72h,记录细胞数量和活率(采用0.4%的台盼蓝染色法计数及计算活率)。2.7.2.5细胞活率计算1)细胞染色:取吸管1支,伸入培养瓶中,轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后,立即吸细胞悬液少许,向另一离心管中滴入细胞悬液1份,再滴入台盼蓝染液1份,混匀,置2~3分钟。2)计数:按2.7.1.4步骤1)进行。镜下观察可见细胞分散各处,健康细胞胞体完整,透明不着色,凡着色细胞均为死细胞。记录活细胞数及细胞总数。3)活率计算细胞活率%=(活细胞数量/细胞总数)×100%2.7.2.6分析结果的表述悬浮培养72h的细胞形态应正常,培养72h细胞数量应达到1.0×106个/ml以上,活率应达到90%以上。2.8牛血清白蛋白残留量依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅧI牛血清白蛋白残留量测定法进行,不得检出牛血清白蛋白。2.9抗生素残留量依据中华人民共和国药典2010年三部附录ⅨA抗生素残留量测定法进行,不得检出青霉素、链霉素及庆大霉素。
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