在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗。Р革兰氏染色成败的关键是脱色时间,如脱色过度,革兰氏阳性细菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性细菌。而脱色时间过短,革兰氏阴性细菌则会被误认为是革兰氏阳性细菌。脱色时间的长短还受涂片的厚薄、脱色时玻片晃动的程度等因素的影响。脱色时间一般约20-30s。Р1.4.3.5复染Р(1)用番红复染约2分钟。Р(2)水洗:用水洗去涂片上的番红染色液。Р(3)晾干:将染好的涂片用吸水纸吸干。Р1.4.3.6镜检Р镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性。被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌,被染成红色的是革兰氏阴性菌。Р2 总结与讨论Р注意事项:Р1、在初步发酵试验中,德汉室小导管倒置时,应先使液体斜面倾斜,再迅速把小导管倒入试管内,如果动作缓慢,则进入试管内的小导管会有气泡,影响实验结果判断。Р2、在平板分离试验中,手拿培养皿时注意靠近酒精灯,对接种环进行杀菌,否则,容易引入杂菌。Р3、革兰氏染色中,注意初染、媒染、酒精脱色、复染的步骤顺序,每一次染色都要用水冲洗至水流没有颜色为止,每次染色都要保证染色时间1—2分钟。Р4、显微镜观察时,注意规范使用。Р问题与思考Р你认为制备细菌染色标本时,尤其应该注意哪些环节?Р答:制备适宜的培养基、在超净工作台上进行、保持无菌环境对培养基、借种环等物品的高温高压灭菌、倒置培养基Р为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?Р 答:因为用油镜观察时,镜头离玻片会很近.如果未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头.镜头非常精密,被污染后不利于下次观察.正常情况下,观察前要用擦镜纸擦拭干净.Р如果你的涂片未经热固定,将会出现什么问题?如果热温度过高,时间太长,又会怎么样?Р答:未经加热,水分蒸发太慢,制片时间过长;加热温度过高或时间过长会导致菌体变形或形态破坏。
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