微生物检验方法验证方案(6)

РBs-Р(F) 98001РCa-Р(F) 98003РAn-Р编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。Р3.1.7器具:无菌薄膜过滤器:(孔径0.45um直径50mm)、无菌移液管(5ml)4.验证方法Р4.1菌液的制备Р将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30~35℃下培养18~24小时,将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养24~48小时。将黑曲霉接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养5~7天。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50~100cfu的菌悬液。Р4.2实验方法Р供试液的制备:取样品10g(ml)加入无菌PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇使分散均匀□,或用匀浆仪混匀□,制成1:10均匀的供试液。РA样品试验组Р取1:10供试品(相当于1g或1ml供试品)1ml,及各50~100cfu的试验菌,分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基;白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养基。РB菌液组Р取上述制备菌液各1ml注入平皿中,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌加入肉汤琼脂培养基,白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰红钠琼脂培养基。РC供试品对照组Р取上述1:10供试液1ml注入平皿中,分别倾注肉汤琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。РD稀释剂对照组Р取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液各1ml及各50~100cfu的试验菌,分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基;白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养基。Р4.3培养Р将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30~35℃下培养48小时,将白色念珠菌、黑曲霉在23~28℃下培养72小时,点计菌落数。Р5.试验结果