库7、DNA重组技术包括那些重要步骤。答:1)外源DNA与载体的连接,形成重组DNA包括:粘性末端连接;平头末端连接;在DNA片段末端加上均聚寡核苷酸连接;用接头连接2)通过转化或感染将重组DNA引入受体细胞。2)筛选出含有重组体的克隆:插入失活;原位杂交;免疫学方法8、论述PCR(PolymeraseChainReaction)的原理和应用。答:PCR技术是指在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促反应。反映步骤:变性;退火;延伸应用:遗传疾病的诊断;监测癌基因;在法学上的应用;在分子生物学上的应用9、监测蛋白质表达量的实验方法有哪些,Western-blotting的原理、方法。10、论述B型DNA的结构特点。答:a反向平行,互补双链脱氧核糖和磷酸骨架位于双链外侧,走向相反(5’-3’,3’-5’);剪辑配对,A-T,C-Gb右手螺旋,并有大沟和小沟螺旋直径3.4nm螺旋一周10个碱基对,两个核苷酸之间夹角36度,大沟—螺旋之间,小沟—链之间c双螺旋结构稳定力横向是碱基对氢键;介质中和了磷酸基团的负电荷,降低了DNA链间排斥力、范德华力。纵向是碱基平面的疏水堆积力。11、简述DNA和RNA在化学组成、分子结构及生物学功能上的特点。答:DNARNA嘌呤碱A、GA、G嘧啶碱C、TC、U戊糖D-2-脱氧核糖D-核糖酸磷酸磷酸分子结构二级结构中有A-DNA,B-DNA,C-DNA,单链线性分子,部分区域也可Z-DNA,三链DNA几种类型,三级结构为超形成双螺旋结构,碱基配对情螺旋结构况不严格,tRNA中存在稀有碱基功能遗传信息的载体,基因的物质基础;核内DNA含tRNA:氨基酸运载工具;做反量稳定;DNA在代谢上稳定,不受年龄、营养影转录酶引物;参与DNA合成响;DNA受理化因素作用可引起遗传特性改变。mRNA:蛋白质合成模板rRNA:蛋白合成场所
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