L,在冰水中冷却 2 min,加入 6.00 mL 蒽酮-硫酸溶液,摇匀,在冰水中冷却Р 2 min. 将试管放入沸水中 5 min,各试管显色呈蓝绿色,取出试管,冷却至室温. 用2.00 mL 蒸馏按照上述操作作为空白参比,于 640nm 波长下比色,测定各试管溶液的吸光度. 以吸光度为横坐标,淀粉浓度作为纵坐标,绘制工作曲线,进行曲线拟合,得到吸光度和淀粉浓度之间的回归公式。Р 四.操作步骤Р 1.称取 1-2 g 饲料样品于 80 mL 离心管中,可溶性淀粉称取0.5g其中包括 2 个重复,加入 80%乙醇溶液 2 滴使样品湿润。Р 2.再加入 5 mL 水摇匀,加入 25 mL 热的 80%乙醇溶液, 摇匀后放置 5 min, 以2500 /分钟速度离心 5 min,倾出上清液。Р 3. 再用 30 mL 80%乙醇溶液提取1次。Р 4.于上述残留物中加入5 mL水和 30 mL 52%高氯酸溶液,搅拌 10 min,以 2500转/分钟离心 10 min。Р 5.将上清液转入 100 mL 溶量瓶中,残留物再用 35 mL 52%高氯酸溶液提取,合并提取液,以水定容。Р 6. 过滤,弃去最初5 mL滤液,吸取4.00 mL滤液于100mL溶量瓶中,加水定容. 取上述淀粉提取液 2.00 mL,测定沸水浴显色后溶液的吸光度.Р 五.计算公式Р 淀粉(%)=G/(8M).Р 式中:G 为由饲料样品提取液测定的吸光度,由工作曲线回归公式计算出来的淀粉毫克数; M 为饲料样品的质量;Р 最后换算成每克饲料干物质中淀粉的含量。对于淀粉含量高,而且粗纤维含量低的谷物籽实饲料,推荐使用高氯酸水解-蒽酮比色法,其测定结果差较小,而作步骤快捷简便;对于粗纤维含量高的粗饲料,建议用酶水解法测定,但由于操作步骤繁琐,应尽量减少操作本身造成的实验误差,而且应该选用纯度高、活性强的酶制剂。
全文预览
