的制作取7支具塞试管,按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液,每个浓度做 2-3 个重复: 管号 0123456 标准葡萄糖溶液/mL0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 6mL ,振荡混匀, 各管加完后一起置于沸水浴中加热 15min 。取出, 迅速浸于冰水浴中冷却 15min 。在625nm 波长下以第 1管为空白,迅速测定其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量( ?g)为横坐标,以吸光值为纵坐标, 绘制标准曲线。样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围,精确吸取 2 mL 置于干燥洁净试管中, 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 6mL ,振荡混匀, 各管加完后一起置于沸水浴中加热 15min 。取出, 迅速浸于冰水浴中冷却 15min ,每个浓度做 2-3 个重复。在625nm 波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线,由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度,并计算其糖含量。四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物,不但可测定戊糖与已糖,且可测所有寡糖类和多糖类,包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值,但在测定水溶性碳水化合物时, 则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时则可避免此种误差。
全文预览
