:Р ①定期观察并触摸注射部位有无结节形成,且形成的任何结节均应进行双向测量并记录。Р ②阳性对照组至少有9只有进行性肿瘤生长时,试验视为有效。Р ③如试验组动物有进行性生长的结节或可疑病灶,应观察至少1~2周;若出现的结节在观察期内开始消退,则应在结节完全消退前,处死动物并进行解剖做病理及组织学检查。④未发生结节的动物,半数动物应观察21天,剖检,另外半数动物应观察12周,进行病理检查,剖检接种部位,观察各淋巴结和各器官有无结节形成,如有怀疑,进行病理组织检查,不应有转移瘤形成。Р 除上述体内法外,也可采用软琼脂克隆形成试验或器官培养试验等体外法检测,特别适用于低代次时,动物体内无致瘤性的传代细胞系。Р (四)生产用细胞培养Р 生产用原材料的选择和细胞操作环境,应符合本规程"一、(二)细胞库的建立"中有关规定。Р 从冻存的WCB中取出一支或多支安瓿,混合后培养,传至一定代次后供生产用。其代次不得超过该细胞用于生产的最高限定代次。从WCB取出的细胞种子增殖的细胞不得再回冻保存或再用于生产。Р 体外培养细胞龄的计算Р 二倍体细胞龄以细胞群体倍增(Population Doubling)计算,以每个培养容器细胞群体细胞数为基础,每增加一倍作为一世代,即一瓶细胞传二瓶(1:2分种率),再长满瓶为一世代;一瓶传四瓶(1:4)为二世代;一瓶传八瓶(1:8)则为三世代。生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3内。Р 传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代,每传一次为一代。Р 二、连续传代细胞系的特殊要求Р 传代细胞系一般是由人或动物肿瘤组织或正常组织传代或转化而来,可悬浮培养或采用载体培养,能大规模生产。这些细胞可无限传代,但到一定代次后,致瘤性会增强。所以Р 对生产用传代细胞系应进行严格检查。应按本规程"一、(三)细胞库细胞的检定"的规定进行细胞库的检查。对生产过程中细胞培养的要求如下:
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