者费时费力,易污染; 后者具有快速、准确、能够避免污染等优点,是检测已知点突变的良好技术平台, 应应用于临床,更适合大规模人群的筛查。 4 、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法: 通过对100例生育过游离型DS患儿的汉族母亲及100例相匹配的正常对照组母亲,检测 MTHFR 677C →T,MTHFR 1298A →C,MTRR 66A →G的基因型和血浆中 HCY的水平以及通过HCG与AFP二联查出的100例筛查单胎孕妇及相匹配的正常对照组孕妇进行 MTHFR 677 基因型检测。实验步骤: (1)人全血 DNA 快速提取(参照大量血液基因组 DNA 抽取试剂盒说明书)。(2)MTFHR 基因 677 位点多态性分析。(3)MTHFR 基因 1298 位点多态性分析。(4)MTRR 基因 66位点多态分析采用 MGB-TaqMan 实时 PCR 检测法。实时定 PCR 分析使用 ABI 9700 型PCR 仪和 ABI 7900 型荧光定量 PCR 仪。(5)血浆 HCY 浓度测定。(6)用 MTT (四甲基偶氮唑盐)检测法进行 MTX 细胞毒实验。(7)统计学处理可行性分析: (1)叶酸与 HCY 代谢障碍及相关基因多态和 DS的发生有关这一假设已相继在不—7—同的国家、种族研究中得以证实。(2)实验室具备课题开展的设备条件。 5 、预期进展和成果(1)在 DS的发生中,是否存在不同基因的协同作用。(2)MTHFR 677C/T 的变异是否 HCY 升高的唯一决定因素。(3)其他 HCY 代谢中的酶和转运蛋白的基因和多态改变的影响。三、经费预算 1、实验所需相关试剂及耗材等—— 10000 元; 2、PCR 、基因检测等分析测试费—— 2000 元; 3、论文发表版费、申请专利费等—— 3000 元。共计 15000 元。四、导师意见及指导签名—8—年月日
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