测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

锅电子天平Р儿茶素标准品(浓度>=98%);香草醛( 分析纯) ;硫酸( 分析纯) ;冰乙酸( 分析纯) ;实验用水为二级反渗透去离子水。Р 二、实验步骤Р1.配制试剂Р( 1 )配制儿茶素标准品溶液:称取一定量的儿茶素标准品,分别用去离子水定容至一定体积,配制成物质的量浓度为 0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液; Р( 2 )配制香草醛乙酸溶液:称取一定量的香草醛,分别用乙酸定容至一定体积,配制成浓度为1 %;Р( 3 )配制硫酸乙酸溶液:量取一定体积的浓硫酸,分别用乙酸定容至一定体积,配制成浓度为3 0 %的硫酸乙酸溶液。Р(4)样品溶液:原花青素溶液Р以火棘果为原料,按液固比 6:1加入 4 0 %乙醇溶液,4 5 ℃下浸提 1.5 h,问歇搅拌,连提3次,过滤,滤液旋蒸,回收溶剂。浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附,用去离子水洗涤、6 0%乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,6 0%乙醇洗脱液即为样品溶液。Р扫描最大吸收波长Р取0.5mL儿茶素标准品溶液,加入2.5mL30% 的硫酸乙酸溶液,2.5mL 1% 的香草醛乙酸溶液,混合均匀,30℃水浴中避光反应15min。以无水乙酸做参比,在可见光区(400~800nm)进行光谱扫描。确定最大吸收波长,以后在此波长下测定样品的含量。Р绘制标准曲线(在最大波长吸收处测得吸光度)?Р浓度Р0.025Р0.035Р0.045Р0.055Р0.065Р0.075Р0.085Р0.095РA(儿茶素)Р0.105Р0.115Р0.125Р0.135Р0.145Р0.155Р0.165Р0.175РA(儿茶素)Р0.185Р0.195Р0.205Р0.215Р0.225Р0.235Р0.245РA(儿茶素)Р测原花青素样品的吸光度,通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。Р注:实验须重复4次,