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酶联免疫分析法

上传者:菩提 |  格式:ppt  |  页数:85 |  大小:3081KB

文档介绍
ogenicity)指诱导刺激免疫系统产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。具有免疫原性的物质称为免疫原(immunogen)。免疫反应原性(immunoreactivity)或抗原性(antigenicity),指能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合,引起免疫反应的性能。具备上述两种特性的物质为完全抗原,仅具有免疫反应性的物质被称为半抗原(hapten)。Ag+AbAg-Ab该免疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学基本原理,其反应式为式中:k1为正反应速率常数;k2为负反应速率常数;K为反应平衡常数(亲和常数)。基于抗原-抗体反应的检测技术主要应用于以下几个方面:①用已知抗原检测未知抗体;②用已知抗体检测未知抗原;③定性或定量检测体内各种大分子物质;④用已知抗体检测某些药物、激素等各种半抗原物质。二、酶标记免疫分析法及常用标记酶1、免疫分析法分类2、几种常用酶(1)对酶的要求①纯度高、催化反应的转化速率高、专一性强; ②具有足够的偶联用标记基团,与抗原、抗体蛋白分子偶联后仍保持较高的催化活性; ③使用稳定性和保存稳定性好; ④测定酶活性的方法简便、灵敏、快速; ⑤待测体液中不存在与标记酶相同的酶;⑥待测溶液中应该无底物、反应抑制剂和其他与酶发生反应的干扰物质;⑦酶的来源、纯化和供应较方便,价格较低廉;⑧均相酶免疫测定法中使用的酶,还要求当抗体与半抗原-酶结合物结合后,酶活性表现出抑制或激活。(2)酶的评价指标通常用RZ和酶的比活力评价标记酶的质量。RZ表示酶的纯度,以酶蛋白中活性部分与非活性部分最大吸光度的比值。 HRP RZ=OD403nm/OD275nm酶的比活力指在特定条件下,每1mg酶或每1ml酶液所具有的酶活性单位数。HRP:RZ﹥3活性>250u/mg,免疫学用;RZ>2活性>180u/mg,临床化学用;RZ>1活性>100u/mg,血糖试纸和尿液分析试纸用

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