? 理想载体应当具备以下性质?具有亲水性多孔结构,无非特异性吸附,比表面积大; ?物理和化学稳定性高,有较高的机械强度,使用寿命长; ?含有可活化的反应基团,用于亲和配基的固定化; ?粒径均一的球形粒子。? 亲和色谱的载体主要有琼脂糖、纤维素、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃等。Р10/2/2018Р5Р目前,许多活化载体已商品化,可供各种配基的固定化。? 商品化的亲和吸附介质种类有限,不能满足各方面要求。在实际应用中,特别是在科研工作中往往需要在实验室内合成所需的亲和吸附介质。合成的方法很多,如溴化氰活化法、环氧基活化法、间接固化法、硅胶活化法、间隔臂法等。Р10/2/2018Р6Р三、亲和色谱分离的影响因素? ①pH和离子强度? 通常预分离料液中目标产物浓度很低,而杂质大量存在,即使只有少量杂质发生了非特异性吸附,也会大大降低分离纯化的效果。? 一般来说,杂质的非特异性吸附量与其浓度、性质、材料、配基固定化法以及缓冲液的离子强度、pH和温度等因素有关。Р10/2/2018Р7Р②料液流速?③清洗? 清洗操作的目的是洗去吸附介质内部及柱空隙中存在的杂质,一般使用与吸附操作相同的缓冲液,必要时加入表面活性剂,保证目标产物的吸附和杂质的除去。? 由于亲和吸附是可逆的,清洗过度会使目标产物的损失增多,特别是亲和结合较弱的亲和体系;清洗不充分,则使洗脱回收的目标产物纯度降低。Р10/2/2018Р8Р④洗脱?特异性洗脱? 洗脱剂中含有与亲和配基或目标产物具有亲和作用的小分子化合物,通过这些小分子化合物与亲和配基或目标产物的竞争性结合,脱附目标产物。? 特异性洗脱法的洗脱条件温和,有利于保护目标产物的生物活性。Р10/2/2018Р9Р非特异性洗脱? 通过调节洗脱液的pH、离子强度、离子种类或温度等理化性质降低目标产物的亲和吸附作用,以达到洗脱的目的。Р10/2/2018Р10
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