及容易获得活体直接观测结果等优点,因而已成为研究神经系统结构和功能的有效手段。Р九十余年来,这项技术已从组织块(或植块)培养(explant culture)发展到分离细胞培养(dissociated cell culture),并逐渐与多种现代技术结合起来,在神经科学各领域发挥了重大作用。Р组织块培养→分离细胞培养→甚至单一型细胞培养Р神经组织的植块培养法Р悬滴培养方法?单盖玻方法?双盖玻方法 1925?改良双盖玻方法?培养物:? CNS灰质、白质、外周神经节或神经小段? ↓↓? 突起非神经元外伸Р优点Р所需培养液量少,可反应组织代谢中? 微量生化改变Р 保留了植块内组织特征Р不足Р培养空间小,O2 CO2供少Р 培养空间湿度难以控制,水分会蒸发Р 密封手续繁杂,不利更换培养液,难? 以观察单个神经元生长。Р神经元的分离细胞培养方法Р1956年,Nakai首创了神经组织的分离培养方法Р材料来源:胚胎动物神经组织Р神经元增殖发生于胚胎期Р形态学分化和化学分化程度低,体外存活强,成熟后则相反,且神经元会受到大的普遍损伤。Р部位:灰质、PNS神经节,神经元集中,密度大Р神经元的体外培养液Р天然合成成分血清血浆胚胎撮液? 人工培养基? 无血清培养基化学限定性培养基? 常用的:DMEM + 添加剂? F12Р①葡萄糖为神经元能量代谢主要来源 33mmР②CO2 NaHCO3缓冲系统重要 HEPESO2耗量更高Р③K+ 神经元生理活动的重要离子,K+是神经元存活所必需的,K+ 24.5mM 能提高神经元存活,促分化Р④非神经元成分的抑制有 2-3天Р神经元无血清限定培养液Р人工合成的培养基虽然具备了细胞生长的基本营养物质和无机盐类,但仍无法满足不同类型细胞的特殊需要。大多数神经元在基础培养液中即使能够存活也为期不长,更难以分裂。因此可根据神经元的特性,给基础培养中再添加某些特殊物质。
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