供稳定的5%二氧化碳。可自动调节细胞代谢引起的PH改变。Р(4)温度:细胞培养的最适温度与细胞来源的动物体温一致,温度增加2–3℃对细胞产生不良影响,使之在24h内死亡。低温对细胞影响较小。Р7/30/2018Р7Р(5)无菌条件:细胞培养的关键之一是要有无菌概念,要防止污染。在细胞培养中,可能发生污染的来源很多,有组织培养液、器皿、组织本身、工作者本身、空气等。因此要对培养液、器皿用具、操作室进行彻底消毒,在操作时要严格实行无菌操作。Р(6) 培养器皿的处理:培养器皿处理的好坏与否对于细胞的贴壁生长影响很大。常用的器皿主要有玻璃及塑料二大类。玻璃器皿一般须用清洁液浸泡过夜、清水洗10次后再用蒸馏水洗2次,烤干备用。塑料板一般用2%NaOH浸泡1小时后,清水洗净再用1N HCl浸泡1小时,用清水洗后再用蒸馏水漂洗。37℃干燥后,紫外线照射消毒。Р7/30/2018Р8Р(四)组织培养的优缺点及应用范围:Р优点:可提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,对疫苗生产来说,其抗原性更接近于自然流行株,可减少宿主蛋白成分,减少变态反应。?缺点:病毒复制后滴度低,不易保存,保存时易使病毒滴度丢失,传代细胞含致癌因子,不宜用于疫苗生产。且随着细胞代数增加,对病毒敏感性也随之下降。?应用范围:目前组织培养技术已应用于病毒学的各个部门,不仅应用于病毒性疾病的诊断及疫苗制备,也深入应用到病毒学基础理论的研究Р7/30/2018Р9Р二、组织培养分离流感病毒Р流感监测最主要的目的是及时发现并分离到有意义的流感病毒新变种,尤其大流行株,用于诊断试剂的制备、疫苗的生产及疫情预报。组织培养技术是分离,诊断流感病毒最常用和最可靠的方法之一。?人流感病毒最初是通过雪貂分离出,但雪貂繁殖慢,量少,价钱昂贵并难饲养,故无法加以广泛应用。上世纪30年代中开始,多用鸡胚来分离流感病毒。Р7/30/2018Р10
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