一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中。体内培养: 将实体瘤细胞直接接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位, 引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代。基础知识基础知识贴附生长必须贴附于支持物表面才能生长,见于各种实体瘤细胞培养细胞生长方式悬浮生长于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞培养细胞生长的条件? 1 细胞的营养需要:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、生长因子? 2 细胞的生存环境温度: 37 ℃ O 2 CO 2 : 5% pH: 7.2-7.4 渗透压? 3 无污染? 4 无毒实验准备?细胞培养室: 无菌操作区、清洗准备区、消毒无菌区、物品储藏区、培养孵育区、研究观察区?培养室仪器: 超净工作台、 CO 2 培养箱、倒置显微镜、酶标仪、微孔板震荡器、液氮罐、水浴锅、离心机、电动吸引器等?培养用耗材: 培养瓶、吸管、培养板、冻存管、记数板等 CO2 培养箱设定的条件为 37 ℃,5% CO 2。使用 CO2 培养箱培养细胞时应注意的问题: ①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松, 以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒③箱内灭菌蒸馏水 3000 毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避兔培养液蒸发。 CO2 培养箱实验准备实验准备消化液常用的胰蛋白酶液浓度是 0.25 % 胰蛋白酶液消化时间 2-10 分钟用含血清培养液终止其对细胞的消化作用培养基天然培养基:有血清、血浆、和组织提取液合成培养基:用人工方法模拟合成的, MEM , RPMI-1640 、 DMEM 等。抗菌素通常是青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为 100U/ml ?培养用器皿的清洗、包装、消毒?无菌操作?培养细胞的观察、检测?培养细胞的传代?培养细胞的冻存与复苏基本技术
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