分子生物学实验设计

基因分析?DNA甲基化分析?突变分析, PCRР基因水平Р(三)应掌握的技术与操作程序:Р标本收集与处理:?由于不同研究目的,对于标本的处理要求不同。? 免疫组化:选择固定剂? RNA分析:均浆法即刻分离提取或液氮短时间贮存? DNA分析:消化法即刻处理后冻存? 蛋白质分析:视性质而定Р(四)分子生物学实验的特点Р 微量反应体系10-30ul, 各种成分的比例恰当? 步骤多细胞培养或建立动物模型→组织提取? 与样品制备→样品纯度与含量鉴定→指? 标检测? 周期长一次实验需要2-6个月? 投入大Р三、分子生物学实验室的基本配置Р电泳仪、电泳槽(垂直型、水平型)、紫外投射仪及照相设备、电泳转移槽、凝胶成像分析系统等?离心机(常温、低温微量高速)、恒温水浴、恒温摇床、制冰机、冰箱、高压灭菌锅(器)、匀浆机、PCR仪等?细胞培养:C02 孵箱、超净台,滤器等?微量移液器 10、20、50、100、200、500、1000 μl?耗材离心管 1.5、0.5、0.2 μl? 枪头 50、200、1000 μlР四、相关技术与操作程序? 核酸(DNA,RNA)的提取与分离:? DNA、RNA 性质特点,? 关键操作环节,? 实验现象的观察。? 蛋白质提取与分离:? 离心技术:? 层析技术:? 细胞培养:Р分子生物学实验设计Р蛋?白?质?的?分?离?纯?化Р蛋白质的分离Р根据分子量的大小Р透析---- 脱盐,浓缩?超滤膜---脱盐,浓缩,分级纯化?分子筛(葡聚糖)?密度梯度离心Р根据溶解度分离Р盐析(破坏电荷和水化膜)?低温有机溶剂(低温丙酮)?等电点沉淀Р根据电离性质Р点泳法Р离子交换树脂(阴离子交换树脂(+)Р醋酸薄膜点泳?PAGE?等电聚焦点泳?毛细管点泳Р蛋白质浓缩Р超滤法?冷冻干燥?吸收法?沉淀法Р应用Р纯化蛋白用于研究蛋白特性?制备小肽类药物?疾病机制研究(给予蛋白导致疾病等)