Cl溶液中,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。核酸的钠盐比游离酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。Р天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在。 DNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在0.14 mol/L的氯化钠中溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。Р背景知识 1Р背景知识 4Р不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法,以获得可用的DNA大分子,尤其是组织中的多糖和酚类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考虑除去多糖和酚类物质。Р提醒Р真核细胞基因组提取的方法Р浓盐法?离子去污剂法?苯酚抽提法?水抽提法?CTAB法РDNA提取基本方法:?1. 机械法破碎细胞?2. 去除蛋白质,酚类等细胞内杂质污染?3. 纯化DNAРCATB法的简析Р冷冻和研磨,使细胞破裂?加入CTAB提取缓冲液,溶解DNA?氯仿/异戊醇抽提,去除蛋白?加入无水乙醇/异丙醇,沉淀DNA?酒精冲洗,去除剩余杂质?RNase消化,去除RNA?无菌水/TE溶解,保存DNAРCTAB法实验原理Р离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁,且与DNA形成可溶于高盐溶液的复合物,当降低盐浓度时DNA又可沉淀析出,从而与蛋白质及多糖等分离。
全文预览
