性对照物: 环磷酰胺、丝裂霉素 C、三亚乙基密胺、甲磺酸乙酯、乙基亚硝基脲…③小牛血清(使用前 pH 调至 6.4 ) ④甲醇⑤磷酸缓冲液⑥ Giemsa (吉姆萨)染液:用时,将 Giemsa 原液用 pH6.4 的磷酸缓冲液 1:10 稀释(三)器材:(略) 实验设计一、实验动物: ICR 小鼠,体重 18-22 克,每组 10只,雌雄各半,随机分组二、剂量分组: 原则: 最高剂量可选用动物的最大耐受剂量或化合物 LD50 的 50% 不能引起明显的骨髓抑制,即 PCE/(PCE+NCE) 不低于对照值的 20% (因为骨髓发生抑制时,外周血会发生反流) 氟化钠: LD50=224.9mg/kg 阴性对照组水受试物剂量组高剂量组 224.9 * 50%= 112.5 mg/kg 中剂量组 112.5 * 1/2= 56.25 mg/kg 或* 1/4=28mg/kg 低剂量组 56.25 * 1/2= 28.125 mg/kg 或* 1/4=7mg/kg 阳性对照组环磷酰胺 120 mg/kg 1/2 1/4 1/8 11.25mg/ml 5.625mg/ml 2.8125mg/ml 0.1ml/10g NaF:90mg 8ml 11.25mg/ml 4ml 4+ 4ml 5.625mg/ml 4ml 4+ 4ml 2.8125mg/ml 三. 染毒途径:灌胃四. 染毒次数及骨髓采样时间?一次染毒、间隔 24小时两次染毒、多次染毒?应于最大敏感期取样(预实验) ?本次实习采用一次染毒, 24小时后取样测定操作步骤 24 小时后制片染色镜检染毒取材取骨擦净血污、剔去肌肉剪去骨骺端小牛血清混匀、推片吹干甲醇中固定 2min Giemsa 染色液染色 10-15min pH=6.4 pH=6.4 冲洗、晾干镜检、细胞计数
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