一节免疫组织化学基本原理Р一、直接法? 用酶或其它标记物标记的特异性抗体直接与标本中的相应抗原结合,再与酶的底物作用产生有色产物沉积,在抗原抗体反应的部位即可检测。Р优点:简单快速,特异性强,非特异性反应低;?缺点:敏感性差;抗原量要求高;很难获得各种市售标记抗体。(肿瘤蛋白标记物:低丰度蛋白)Р在免疫荧光和免疫酶技术中因材料处理不当或用量不当产生的背景着色反应。Р第一抗体(兔)不标记,使用与一抗种属相同抗体的Fc段(有种属特异性)作为抗原免疫动物(羊),制备抗抗体,即第二抗体(羊抗兔),并标记第二抗体。Р二、间接法Р染色时,顺次以第一抗体和标记的第二抗体处理标本,在抗原存在部位形成抗原-第一抗体-标记第二抗体复合物,以达到检测该抗原的目的。Р优点:间接法因第二抗体的放大作用敏感性大大增高(放大原理=抗原:抗体1:6);?缺点:可能出现非特异性反应;Р子宫内膜巨噬细胞移动抑制因子MIFР三、亲和免疫组织化学Р(一)亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-plex method,ABC法)?特点: 以亲和素作为“桥”将生物素结合的酶和生物素化的抗体连接起来,使抗原与抗体反应信号放大,以增加敏感性。? 1.原理:?生物素(biotin)为含硫的杂环单羧酸,生物素分子量为244.31,pI为3.5,咪唑酮环(又称Ureido环)(I环)是与亲合素结合的主要部位;Ⅱ环为噻吩环有一个戊酸侧链,末端羧基是标记抗体和酶的唯一结构。РIРIIР亲和素(avidin)又称抗生物素蛋白,是一种糖蛋白,分子量为6.8KD,pI 10~10.5;在pH9~13缓冲液中性质均稳定。天然(卵白)亲合素为碱性蛋白,由4个相同的亚单位构成4聚体;每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的Ureido环(I环)结合。因此,1个亲合素分子存在4个与生物素分子结合位点РABC法
全文预览
