斑点金免疫渗透试验的原理、技术类型Р斑点金免疫层析试验的原理、技术要点Р临床应用及评价Р胶体金(colloidal gold)也称金溶胶(goldsol),是金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。Р什么叫胶体金Рzeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥,以维持胶体金的稳定状态。Р基础金核?双离子内层负离子(AuC12-) zeta电位? 外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中Р胶体金的制备Р制备原理Р还原法:用一定量的还原剂把一定浓度的金盐溶液还原成金离子。?常用的金盐是氯金酸?还原剂是枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠Р胶体金的制备Р制备方法Р氯金酸水溶液加热沸腾》》搅拌着加入枸橼酸钠水溶液》》金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为紫红色》》再煮沸15min冷却后以蒸馏水恢复到原体积Р免疫金制备Р胶体金与抗原抗体等大分子物质结合形成Р制备原理Р将蛋白质吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程?环境pH值和离子强度是影响吸附的主要因素Р免疫金的制备Р技术要点Р㈠胶体金溶液pH值的调配?0.2mol/LK2CO3或者0.1mol/LHCl调整到标记蛋白质带等电点货稍偏碱。通常要经多次试验。Р㈡蛋白质最适用量的确定?用标记蛋白质作系列稀释,分别取0.1ml蛋白质稀释液加入1ml胶体金溶液中,并设不加蛋白质的对照管加入10%NaCl溶液0.1ml混匀、静置2小时。选以红色不变管中蛋白质含量最低为稳定1ml胶体金所必需蛋白质的量。Р㈢胶体金的标记?按照最适比,在电磁搅拌下将所需要量的胶体金加入一定量的蛋白质溶液中,加入一定量的稳定剂,调整pH至8.5,离心,轻吸上清液,用缓冲液悬浮,恢复原体积后再离心,重复操作2、3次。Р㈣胶体金结合物的纯化与鉴定?纯化:超速离心法和凝胶过滤法?鉴定:电镜测定颗粒的平均直径以及免疫组化滤纸模型测定结合物的特异性、敏感性Р㈤保存?用稀释液配制成工作浓度保存
全文预览
