免疫组化Immunohistochemistry汪丛丛 2013年9月免疫组化免疫组化(Immuno-histo-chemistry)IHC应用抗原与抗体特异性结合的原理,对组织或细胞内的抗原进行原位定位、定性及定量检测的技术。一、免疫组化步骤样品制备预处理抗体检测显色反应样品制备样品制备:?组织:石蜡切片、冰冻切片?样品固定:固定液?包埋:脱水、透明、浸蜡?切片?细胞:细胞爬片预处理?抗原修复?内源酶封闭?非特异性位点封闭原理:?甲醛的聚合作用,造成细胞内的蛋白质分子键相互交联?固定液的作用,使氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键?细胞内抗原决定簇被掩盖,抗原不能与抗体充分反应作用:?掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露?抗原性得到一定程度的恢复?提高免疫组化染色的阳性率抗原修复直接法Tissue AntigenLabeled Antibody?将荧光、酶直接标记在一抗上优点:?简单方便缺点:?灵敏度低?每种一抗都需要进行标记间接法Tissue AntigenPrimary AntibodySecondary Antibody?将荧光、酶等标记在二抗上优点:?灵敏度高?只需要少数标记的二抗可以和相应的一抗反应免疫组化—SP法SP法--链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(streptavidin-peroxidase)?一抗?生物素标记的二抗?Streptavidin-HRP(HRP标记的链霉亲和素)?简化实验步骤?减少非特异性背景 ABC法(Avidin Biotin-plex)?一抗?生物素标记的二抗?Avidin-Biotin-plex(亲和素-HRP标记的生物素)?亲和素与HRP标记的生物素混合,放置30分钟。?一个亲和素分子具有可与生物素结合的四个部位。?大大增加了结合到生物素上的过氧化物酶,提高了显色反应的灵敏度。免疫组化—ABC法
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