。?3、辅助诊断病毒性疾病病毒凝集红细胞的特性能被对应的抗体抑制。四、实验材料(以新城疫抗体效价检测为例) ?仪器: 96孔V型微量反应板、振荡器 1台(振荡96孔V型板) 、微量移液器等。?材料:新城疫浓缩抗原、 1%的鸡红细胞悬液、生理盐水、待检鸡的血清。 1% 红细胞悬液制备?1、抗凝血的制备采集 3只非免疫成年健康鸡血液,由翅静脉或心脏采血,按 3.8% 柠檬酸钠与血液 1: 4混合制成。?2、1%红细胞悬液制备将抗凝血加入离心管内, 经2000r/min 离心 5min ,用吸管吸去血浆和白细胞。将沉淀的红细胞加生理盐水洗涤,再离心 5min ,弃去上清液,再用生理盐水洗涤。最后一次离心时间为10min ,离心结束后,弃去上清液,根据剩下的红细胞体积,用生理盐水配制成 1%红细胞悬液。五、实验方法与步骤?1、加稀释液。用微量移液器向反应板的第 1~12 孔各加生理盐水 50微升。?2、倍比稀释抗原。首先用灭菌的生理盐水将鸡新城疫浓缩抗原作 5倍稀释。然后用微量移液器吸取 5倍稀释的抗原 50微升于第一孔中,并反复吹打 4-5 次, 混匀后吸出 50微升至第 2孔,依次倍比稀释到第 11孔, 从第 11孔吸出 50微升弃去; 第12孔不加抗原作为红细胞对照。(一)血凝实验( HA) 抗原稀释倍数孔号 123456789 10 11 12 抗原稀释倍数 2 1 2 22 32 42 52 62 72 82 92 102 11对照?3、加 1%的鸡红细胞悬液。用微量移液器向 1- 12孔各加 1%红细胞悬液 50微升。?4、置于微量振荡器上,振荡 1分钟。?5、室温静置 15-20 分钟后观察结果。?6、结果观察: 方法 1:从平面观察,红细胞为一小圆点沉于孔底者,表明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔底的红细胞铺平孔底,凝成均匀薄层,说明红细胞被病毒所凝集。如下图
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