抗体 6 耨疆农业大学硕士学位论文引起有非特异反应。间接荧光抗体试验可用于盖玻片上或载玻片上生长组织培养细胞感染山羊痘病毒后的检测,但是此法检测结果与副痘病毒及其他痘病毒会有交叉反应。 1.7.10ELISA实验高度特异性的ELISA建立的前提是将具有较强抗原性的山羊痘病毒结构蛋白克隆,并将该组抗原用于诊断试剂,包括P32的单价多克隆抗血清和单克隆抗体。此法首先是将纯化的山羊痘病毒免疫家兔制备高免血清,再将此血清包被 ELISA板,这种血清可以结合活体组织病料或组织培养上清液中的羊痘抗原,同时抗羊痘病毒群特异性结构蛋白P32的豚鼠血清也可以识别该抗原,加入商品化的辣根过氧化物酶结合物(酶结合的兔抗豚鼠免将球蛋白)和色原/底物溶液即可鉴别。 1.7.11 PCR技术检查细胞培养中的羊痘病毒基因组和皮肤活体组织可用PCR技术,这种方法和ELISA相比,比ELISA更灵敏,这种方法的原理是病毒附着蛋白基因和病毒融合蛋白基因的引物都具有山羊痘病毒特异性,再利用限制性内切酶识别位点来证实PCR产物的特性。用PCR检测羊痘病毒可以克服传统血清学试验的许多不足, 如血清学方法不能区分疫苗免疫与自然感染;再者血清学方法无法区分副痘病毒和来源于牛、绵羊和山羊的山羊痘病毒株,是因为血清学试验的检测对象是抗体, 存在交叉反应。国内初步建立用PCR方法诊断山羊皮肤组织中山羊痘病毒的是郭巍、陈杰等,这种方法利用PCR反应对羊痘病毒P32基因进行扩增,以检测皮肤组织样品中的痘病毒,但是因为此法需要一定的核酸,而在操作过程中核酸可能会丢失, 给试验造成一定的障碍。P.Markoulatos等人建立了一种比单一引物PCR方法有更高敏感性和特异性的方法,这就是利用三对引物、一步扩增的多重PCR技术, 此法优点是简单、快速、准确且特异性强,缺点是有时会有一些假阴性结果的出现。 1.7.12Westem印迹试验
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