细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)

%FBS条件培养基;Р(6)37℃培养箱中,孵育20-24h;Р(7)取出transwell用PBS洗2遍, 5%戊二醛固定,4℃;Р(8)加入结晶紫(0.1%)染色或Giemsa染色(5-10min),室温0.5h,PBS洗2遍,用棉球擦去上表面细胞,显微镜下观察。Р Р迁移实验Рtranswell在24孔板中浸泡1小时;消化细胞,无血清培养基洗 2 次,计数,配成细胞悬液,每孔加入100ul细胞悬液;加药刺激;下腔室中加入条件培养基或其他刺激因子;37℃培养箱中,孵育 20-24h;取出 transwell用 PBS洗2遍,5% 戊二醛固定, 4℃;PBS洗2遍,加入结晶紫(0.1%)染色,室温0.5h,PBS 洗 2 遍,用棉球擦去上表面细胞,显微镜下观察计数 10 照相,记录。Р侵袭实验Р取 300ul 无血清培养基,加入 30ul (或 50ug/ 每室) Matrigel ,混匀,( 4 ℃操作,最好在冰浴上),加入上室各 100ul ( 3 个室); 放入 37 ℃培养箱中,孵育 4-5h ( >5h ); 消化细胞,无血清培养基洗 3 次,计数,配成细胞悬液;用无血清培养基洗 Matrigel 洗 1 次;每孔加入 100ul 细胞悬液;下腔室中加入 600ul 无血清条件培养基;37 ℃培养箱中,孵育 20-24h;取出 transwell 用 PBS 洗 2 遍, 5% 戊二醛固定, 4 ℃;PBS 洗 2 遍,加入结晶紫( 0.1% )染色,室温 0.5h , PBS 洗 2 遍,用棉球擦去上表面细胞,显微镜下观察Р Рtranswell小室是否可以重复利用,该怎样消毒Р用棉签轻轻擦去胶和反面细胞,清水冲洗,超声清洗,低挡,30min,清水3×5min,蒸馏水3×5min,室温凉干,用前紫外线小室正面3h,反面6h,微波,低火10min×2,效果很好。