染 FITC 阳性应该集中在右下象限, 不能泄露到十字水平线的上方,单染 PE 阳性应该集中在左上象限,不能泄露到十字垂直线的右方,若是见到细胞群斜向一方,说明补偿没有调好。(四)样品实验组的检测前面部分设置好,就可以检测样品了。调补偿应兼顾 PE 、 FITC 、 ISO , Set pensation, 横纵坐标电压等。(五)数据保存直接按 FiLe → save 。(六)关机 1.放置一管 ddH 2O,运行 2分钟; 2.放置一管 0.1%-1% 有效氯的清洗液,运行 2分钟; 3.放置一管 ddH 2O,运行 2分钟,运行结束后 dd H2O 保留在上样处; 4.退出软件,关闭电脑; 5.关闭电源键,仪器会自动 Shutdown ,时间约为 13min ,完成后仪器电源键自动关闭。(七)注意事项 1.每次跑 ddH 2O均收集在 A01 孔,不可与其他孔混乱,跑水速度可以自定义快一些。 2.门一旦设定,最好不要随意修改,圈定的细胞群若是占进样总细胞数目的比例较少,说明细胞状态不好。 3.除 ddH 2O、有效氯的清洗液外,每个样品均要用 0.7 μm过滤网过滤后才能上机检测。 4.跑样品速度可以选定慢速或者中速。 5.每测一个样品,都 BackfLush 后用 ddH 2O清洗 1分钟再测下一个样品。 6. 耗材仪器的准备: 1.6EP 管、 1mL 移液器、 1mL 一次性枪头、 0.7 μm 过滤网、 50mL 离心管、有效氯清洗液等。 7. 一般贴壁细胞混匀后不需要用过滤网,因为会损失细胞,而悬浮球(特别是 MCF-7 悬浮球)容易聚集,故可视情况用 0.7 μm过滤网,以免堵住检测孔。四. 流式检测数据分析可以用 FLOW JO 7.6 软件或者 BD Accuri C6 Software 软件, 若样品处理好、上机检测调好补偿等, 后期不需要过大的修改。
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