抗体提取与纯化

以高于正常比较X+2S，即大于28.4ug/ml为阳性。Р???IgGР???的Р???CIC?Р抗体提取与纯化Р抗体提取与纯化РР14Р抗体提取与纯化РР?3、注意事项Р抗体提取与纯化Р抗体提取与纯化РР14Р抗体提取与纯化РР1）热聚合人IgC应分装储存于-20℃，不宜频频冻融，不然易解聚；??2）PEG的浓度影响CIC积淀量，须严格配制。????五、高效和液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体?Р从小鼠腹水中纯化?McAb的方法有盐析、离子互换层析、凝胶过滤和?Р亲合层析等。应用?TSKDEAE-SPW离子互换层析柱从小鼠腹水中纯?Р化McAb不单纯化速度快，回收率和得率高，并且保持优秀的生物学活性。?Р（一）原理?Р依据离子互换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样联合于层析柱上，经过增添洗Р抗体提取与纯化Р抗体提取与纯化РР14Р抗体提取与纯化РРР脱液中的离子强度，洗脱并采集蛋白峰。?Р（二）操作步骤?Р腹水离心10000g,10min，除掉细胞和杂质，在4℃下逐滴加入饱和硫?Р酸铵溶液，使终浓度为?40%饱和硫酸铵?Р↓搅拌20～30min?Р离心，积淀用40%饱和硫酸铵清洗2次后溶于PBS，对缓冲液A（pH8.5,?Р20mmol/LTris缓冲液）透析除盐?Р↓4℃留宿?Р用带有1000μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲?Р液A液均衡的TSK?РDEAESPW离子互换层析柱?Р↓?Р洗脱流速1ml/min?Р0～1min：0→5%缓冲液B（20nmol/L?РTris,Ph8.5,含2.0?Рmol/L醋酸钠）?Р1～2min(线性梯度洗脱)：5→20%缓冲液B?Р20～22min：20→0%缓冲液B?Р↓?Р洗脱液用紫外280nm进行监测?Р↓?Р采集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定Р抗体提取与纯化Р抗体提取与纯化РР22Р抗体提取与纯化