抗体的纯化和检测Р抗体的纯化Р抗体的检测Р怎么纯化我们想要的抗体?Р常见单抗的结构、种类、性质Р每个单抗等电点、电荷密度、疏水性、糖基化程度等生化性质各不相同。选择单抗的纯化方法,既要了解他们的共性,又要?了解个性,从而制定相应的纯化策略(下表 3)。Р单抗特性及纯化策略Р纯化步骤Р#抗体的纯化#Р抗体纯化的步骤Р#抗体的纯化#Р饱和硫酸铵沉淀法Р饱和硫酸氨分级沉淀法是从溶液中分离蛋白质的常用方法。这是一种比较原始,非特异性分离技术。?饱和硫酸氨沉淀法作为抗体纯化的第一步,难以得到高纯度的抗体。但是它能够浓缩和出去大部分的蛋白质,尤其是脂蛋白Р#抗体的纯化#Р盐离子溶液Р水分子Р蛋白质溶液Р竞争关系Р溶解度Р基本原理Р这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而被广泛应用。Р水化膜Р强Р弱Р2, 操作步骤Р以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% ?(一)配制饱和硫酸铵溶液( SAS ) ?? 根据样品中的蛋白质的含量以及种类的配制饱和浓度的硫酸铵溶液来沉淀样品中的大多数蛋白质。当然这一步也有利于后边的层析。Р出去杂质Р破碎沉淀细胞Р抗体在里边Р盐析蛋白Р充分沉淀蛋白Р样品预处理Р10000r,30min离心Р保留上清液Р加入饱和SAS(1:1)Р搅拌过夜(4度)
全文预览
