单元来自F质粒Р二、BAC载体工作原理РBAC载体的工作原理与常规的质粒克隆载体相似。不同的是,BAC载体装载的是大片段DNA,一般在100~300kb。对如此大的DNA片段一般要通过脉冲场凝胶电泳来分离。另外,由于BAC载体的拷贝数小,制备难度大。为解决这个问题,有的学者将BAC载体作为外源片段克隆到常规高拷贝质粒载体上,从而在大肠杆菌中以多拷贝的形式复制,便于载体的制备,使用时将高拷贝质粒去掉。Р第四节 P1噬菌体载体和P1人工染色体载体Р一、P1噬菌体的分子特征:Р双链线状DNA,110kb,末端具有10kb左右冗余序列,感染进入大肠杆菌后冗余序列发生重组,形成环状分子,cⅠ决定进入溶原或裂解状态。Р包装方式与λ不同。Р二、P1噬菌体载体元件:复制元件、环化和包装信号、标记基因、克隆位点、填充片段。Р P1噬菌体载体工作原理:与粘粒相似。Р三、P1人工染色体载体:Р结合了P1噬菌体载体和BAC载体的最佳特性,如pCYPAC1,允许外源片段为130-150kb,采用电转化,外源片段的嵌合和重组现象较低,对重组序列的回文结构的忍受性强。Р第五章表达载体Р第一节大肠杆菌表达载体Р一、大肠杆菌表达载体的结构Р原核表达载体:适用于在原核细胞中表达外源基因的载体。Р均是质粒载体,首先必然满足克隆载体的基本要求,然后增加表达元件。Р1、表达元件(expression elements):Р 1)启动子(promoter):三类,即Рlac启动子、trp启动子和它们的杂合启动子tac或trc,都受IPTG诱导。РT7噬菌体启动子Рλ噬菌体的PL启动子。Р2)终止子:依赖于ρ因子或不依赖于ρ因子(遇茎环结构而终止)。Р3)核糖体结合位点(ribosome binding side, RBS):Shine-Dalgarno (SD)序列,ATG与RBS之间的距离很重要,一般3-11bp。
全文预览
