定量。荧光定量RT-PCR也比RT-PCR更加敏感,能够在107-108个单核细胞中检测到1个CTCsError!Referencesourcenotfound.。CTCs的临床应用分析现在已经开发了很多分析方法,分析CTCs的细胞和分子特征,以开发CTCs的在临床疗效上的潜在影响。这些分析方法与CTCs的富集技术相结合,因为每个下游的应用都会对CTCs有自己的要求,比如敏感性,样品纯度,细胞活力,浓缩后恢复细胞的能力。不同的分离技术可能会更适合下游的特殊应用。在医疗样品中,通常建立一种新的方法是和CellResearch结果进行比较。(Immunophenotyping)免疫组织化学染色是CTCs检测和计数的标准技术,这种标准由FDA批准的CellSearch系统树立。这种检定CTCs的标准包括:(1)CK的阳性表达;(2)白细胞抗原CD45的阴性表达;(3)细胞核的阳性染色。癌症特异性的标记也能够用来阳性CTCs鉴定,比如在前列腺癌中使用PSA或者PSMA。CTCs的免疫表型能够直接用于临床医疗,直接影响治疗选择。通过检测CTCs的数目,能够判断患者的病情Error!Referencesourcenotfound.。检测基因拷贝数变化在很多的癌症患者的癌症相关基因拷贝数发生了变化,能够通过FISH的方法来检测。Meng等利用FISH技术分析了乳腺癌患者的CTCs的致癌基因HER2的拷贝数,发现在原发肿瘤和CTCs中,HER2存在一定的非一致性Error!Referencesourcenotfound.。用IF技术和RT-PCR技术的研究也证实了这一情况。这表明,一个HER2阴性疾病的癌症患者经过一定的过程后,CTCs可能发展成HER2阳性。CTCs分析提供了一个通过微创途径反复筛选染色体异常的途径。有趣的是,CTCs的HER2扩增的筛选已经成功的应用于原发性乳腺癌患者。
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